熒光濾光片的作用和怎么選擇濾光片波段？

2022-01-18 09:39:59 NMOT

在熒光光譜測試中濾光片的作用以及怎么選擇濾光片波段呢？

熒光濾光片在熒光檢測系統(tǒng),生命科學儀器的關鍵元件，我們習慣熒光系統(tǒng)的各種濾光片統(tǒng)稱為熒光濾光片，該鏡片是由3個不同的濾光片組成的，主要有有激發(fā)濾光片，透過（發(fā)射）濾光片和二向色濾光片組成的。其中激發(fā)濾光片及發(fā)射濾光片是窄帶通型濾光片，光譜是較窄的通帶，一般8nm-10nm左右。主要是為了獲得熒光能量或獲得熒光成像，熒光濾光片特點是對干擾光的隔離度好，自發(fā)熒光干擾少。目前廣泛用于PCR分析儀，熒光免疫分析儀，熒光顯微鏡等各種醫(yī)療分析和檢測儀器中都會用到熒光濾光片。

激發(fā)濾光片的作用：

在熒光檢測系統(tǒng)中，激發(fā)熒光的波長可通過的濾光片，現(xiàn)在采用帶通濾光片，用于生命科學和生物醫(yī)學領域，主要作用是在生物醫(yī)學熒光檢驗分析系統(tǒng)中分離和選擇物質(zhì)的溦發(fā)光與發(fā)射光的特征波段光譜。

發(fā)射濾光片的作用：

發(fā)射濾光片選擇并傳輸樣本發(fā)出的熒光特征，其他波段光線截止。發(fā)射光的波長比激發(fā)光的波長要長。我們選擇熒光發(fā)射濾光片可以選擇帶通濾光片或者長波通濾光片作為發(fā)射濾光片。

二向色濾光片的作用：

或稱二色鏡或分色鏡，在檢測系統(tǒng)的光路呈45°角放置。二向色濾光片反射一種激發(fā)光并且透射發(fā)射光，激發(fā)光的反射率大于90%，發(fā)射光的透射率大于90%。光譜中不能透過的部分被反射而不是被吸收，濾光片在透射光和反射光下的顏色互為補色，因而又稱二向色濾光片。

熒光濾光片的工作原理

我們在判斷濾光片的參數(shù)一般會看透射率光譜，但往往熒光相對于激發(fā)光的強度非常弱，因此選擇濾光片更需要參考阻擋深度光譜圖，OD值，OD值更能直觀地反映濾光片對光的阻擋特性。在選擇激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片時，兩者的阻擋深度光譜交點（OD交點）是重要的判斷標準，一般要求寬場光源激發(fā)時交點OD值大于5，激光激發(fā)時大于OD6，以實現(xiàn)較好的熒光信噪比。熒光濾光片濾光片選型的一般原則是在成像端盡可能讓熒光,發(fā)射光透過，同時盡可能阻擋激發(fā)光，從而獲得高信噪比信號。一般會建議激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片的透射光譜有一定的距離，納宏光電推薦選擇8nm-12nm帶寬。

常規(guī)PCR熒光通道